tarea 3

Clasificación de los medios de cultivo
- Según su estado físico:
o Sólido: Se utiliza un agente solidificante (el agar) en una proporción por encima del 15% (12-15 g/L). En ellos las bacterias crecen con mayor dificultad, pues los nutrientes se agotan con rapidez en el punto donde se desarrollan no obstante nos permite el aislamiento, purificación y visualización de su crecimiento en colonias, así como su posible identificación a través de medios específicos y diferenciales de caracteres sólidos, elaboración de antibiogramas, etc.
o Semisólido: Presentan agar en su composición e una proporción menor al 5% (2,5g/L). Se utiliza especialmente para el estudio de algunas propiedades bioquímicas (oxidación-fermentación)
o Líquido: No contienen ningún tipo de agente solidificante y son también denominados caldos. Favorecen mucho el desarrollo y multiplicación de las bacterias porque al difundirse éstas por todo el medio encuentran con facilidad las sustancias que necesitan para nutrirse. Se de gran utilizad para la realización de múltiples pruebas.
- Según su composición
o Medios naturales: Aparecen sustancias orgánicas e inorgánicas que se presentan de manera natural.
o Medios semisintéticos: Aparecen moléculas naturales hidrolizadas.
o Medios sintéticos: Aparecen sustancias químicas definidas. Son los más utilizados y siempre deberán contenter:
* Fuente de carbono o azúcar
* Una fuente de nitrógeno
* Compuestos minerales, y entre ellos, oligoelementos
* Factores de crecimiento
o Medios complejos: Su composición no está exactamente definida. Su uso está restringido (sólo en virología y parasitología)

tarea 3

Clasificación de los medios de cultivo
- Según su estado físico:
o Sólido: Se utiliza un agente solidificante (el agar) en una proporción por encima del 15% (12-15 g/L). En ellos las bacterias crecen con mayor dificultad, pues los nutrientes se agotan con rapidez en el punto donde se desarrollan no obstante nos permite el aislamiento, purificación y visualización de su crecimiento en colonias, así como su posible identificación a través de medios específicos y diferenciales de caracteres sólidos, elaboración de antibiogramas, etc.
o Semisólido: Presentan agar en su composición e una proporción menor al 5% (2,5g/L). Se utiliza especialmente para el estudio de algunas propiedades bioquímicas (oxidación-fermentación)
o Líquido: No contienen ningún tipo de agente solidificante y son también denominados caldos. Favorecen mucho el desarrollo y multiplicación de las bacterias porque al difundirse éstas por todo el medio encuentran con facilidad las sustancias que necesitan para nutrirse. Se de gran utilizad para la realización de múltiples pruebas.
- Según su composición
o Medios naturales: Aparecen sustancias orgánicas e inorgánicas que se presentan de manera natural.
o Medios semisintéticos: Aparecen moléculas naturales hidrolizadas.
o Medios sintéticos: Aparecen sustancias químicas definidas. Son los más utilizados y siempre deberán contenter:
* Fuente de carbono o azúcar
* Una fuente de nitrógeno
* Compuestos minerales, y entre ellos, oligoelementos
* Factores de crecimiento
o Medios complejos: Su composición no está exactamente definida. Su uso está restringido (sólo en virología y parasitología)

Tarea No.1

• paramecio

  
  1. m. Nombre de un género de protozoos ciliados con especies muy comunes en las aguas dulces de charcas y estanques;algunas son grandes y alcanzan hasta 2 mm de longitud con forma típica de zapatilla. Sus cultivos se utilizan en biología experimental.
  
  2. Escherichia
  Figure 1Escherichia coli (Enlarged view)
  Figure 2Escherichia coli (Enlarged view)
  Figure 3Escherichia coli (Enlarged view)
  Figure 4Escherichia coli (Enlarged view)
  Figura 1: Células de E. coli B/r teñidas con naranja de acridina visualizadas por microscopía laser confocal de barrido. Los nucleoides fluorescentes y brillantes son visibles en contraste con el citoplasma más oscuro. Las células son aproximadamente 1um de ancho.
  Figura 2: Imagen de contraste de fase de E. coli B/r teñida con naranja de acridina. Los nucleoides fluoresentes en microscopía laser confocal de barrido son visibles como una estructura coralina clara contra un citoplasma oscuro. Las células son aproximadamente 1um de ancho.
  Figura 3: E. coli B/r teñida con naranja de acridina. Los nucleoides se observan como objetos fluorescentes brillantes contra un citoplasma más oscuro. Las células son aproximadamente 1um de ancho.
  Figura 4: Imágen de contraste de fase de células de E. coli B/r montadas en una laminilla cubierta con agar. Las células de los nucleoides aparecen brillantes en contraste con la fase densa del citoplasma. Las células son aproximadamente 1 um de ancho.
  Salmonella es un género de bacteria que pertenece a la familia Enterobacteriaceae, formado por bacilos gramnegativos, anaerobios facultativos, con flagelos perítricos y que no desarrollan cápsula ni esporas. Son bacterias móviles que producen sulfuro de hidrógeno (H2S). Fermentan glucosa por poseer una enzima especializada, pero no lactosa, y no producen ureasa.
  Es un agente zoonótico de distribución universal. Se transmite por contacto directo o contaminación cruzada durante la manipulación, en el procesado de alimentos o en el hogar, también por vía sexual.
  Algunas salmonellas son comunes en la piel de tortugas y de muchos reptiles, lo cual puede ser importante cuando se manipulan a la vez este tipo de mascotas y alimentos.

Tarea No. 3

Calibre (instrumento)

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El calibre, también denominado cartabón de corredera, pie de rey, pie de metro, pie a coliza o Vernier, es un instrumento para medir dimensiones de objetos relativamente pequeños, desde centímetros hasta fracciones de milímetros (1/10 de milímetro, 1/20 de milímetro, 1/50 de milímetro). En la escala de las pulgadas tiene divisiones equivalentes a 1/16 de pulgada, y, en su nonio, de 1/128 de pulgadas.

Es un instrumento sumamente delicado y debe maniobrarse con habilidad, cuidado y delicadeza, con precaución de no rayarlo ni doblarlo (en especial, la coliza de profundidad).

Contenido [ocultar] 1 Historia 2 Componentes 2.1 Otros tipos 3 Véase también 4 Referencias 5 Enlaces externos

Historia

El primer instrumento de características similares fue encontrado en un naufragio en la isla de Giglio, cerca de la costa italiana, datado en el siglo VI a.C. Aunque considerado raro, fue usado por griegos y romanos. Durante la Dinastía Han (202 a.C. - 220 d.C.), también se utilizó un instrumento similar en China, hecho de bronce, hallado con una inscripción del día, mes y año en que se realizó.

Se atribuye al cosmógrafo y matemático portugués Pedro Núñez (1492-1577) —que inventó el nonio o nonius—, el origen del pie de rey. También se ha llamado pie de rey al vernier, porque hay quien atribuye su invento al geómetra Pierre Vernier (1580-1637), aunque lo que verdaderamente inventó fue la regla de cálculo vernier, que ha sido confundida con el nonio inventado por Pedro Núñez. En castellano, se utiliza con frecuencia la voz nonio para definir esa escala.

El calibre moderno con nonio y lectura de milésimas de pulgada, fue inventado por el americano Joseph R. Brown en 1851. Fue el primer instrumento práctico para efectuar mediciones de precisión que pudo ser vendido a un precio asequible.

Componentes

Componentes del pie de rey.

Consta de una "regla" con una escuadra en un extremo, sobre la cual se desliza otra destinada a indicar la medida en una escala. Permite apreciar longitudes de 1/10, 1/20 y 1/50 de milímetro utilizando el nonio. Mediante piezas especiales en la parte superior y en su extremo, permite medir dimensiones internas y profundidades. Posee dos escalas: la inferior milimétrica y la superior en pulgadas.

1. Mordazas para medidas externas.
2. Mordazas para medidas internas.
3. Coliza para medida de profundidades.
4. Escala con divisiones en centímetros y milímetros.
5. Escala con divisiones en pulgadas y fracciones de pulgada.
6. Nonio para la lectura de las fracciones de milímetros en que esté dividido.
7. Nonio para la lectura de las fracciones de pulgada en que esté dividido.
8. Botón de deslizamiento y freno.

Tarea No.2

Pruebas Serológicas

Serológia de la Salmonella typhi

Las muestras deben tomarse a partir del doceavo día para que se puedan valorar adecuadamente. Los anticuerpos ( aglutinas) frente el antígeno somático O son de clase IgM e IgA, y pueden dar reacciones cruzadas con otras bacterias. Son los primeros en aparecer ( alos 8 días), elevandose su título moderadamente ( 1/400) y desapareciendo pocas semanas después. Por ello, aún a títulos relativamente bajos ( 1/100) tiene más valor. Los anticuerpos contra el antígeno flagelar H ( anti-H) suelen aparecer hacia el día 10 de la infección y permanecen más tiempo que los anteriores ( a veces años). En general su título tiene valor diagnóstico a partir de 1/500. Siempre deben determinarse ambos anticuerpos. La reacción de Gruber-Widal es una prueba de seroaglutinación
( antígeno somático O) que suele positivarse a partir de la 2ª semana de enfermedad ( títulos superiores a 1/100), (o a 1/60 en individuos no vacunados). Es fundamental la comprobación de una variación en el título en muestras sucesivas.

Serología del Toxoplasma

El diagnostico de esta enfermedad tiene especial interés en las mujeres embarazadas, ya que si se produce infección durante este periodo existe riesgo de lesiones fetales. La determinación de la IgM específica ( Prueba de Remington) es la que resuelve más dudas en esta situación ( si se trat de una infección reciente o no).

Serología del virus del Herpes

Existen dos virus del Herpes simple serológicamente distintos. El virus del herpes tipo I ( herpes labial) sólo produce lesiones por encima de la cintura. El tipo II ( herpes genital) lo hace siempre por debajo de la cadera. Se pueden cuantificar los niveles de anticuerpos contra dicho virus. Es aconsejable la repetición de la prueba 3 semanas después para comprobar variación en el título. Una determinación aislada inferior a 12 U se considera nagativa, entre 12 y 15 U dudosa y por encima de 15 es positiva.

Serología del virus de la Rubéola

Los anticuerpos contra este virus pueden cuantificarse de dos maneras. Mediante inmunofluorescencia ( título de diluciones) o ELISA ( unidades).
Como los anticuerpos antitoxoplasma, el diagnóstico de esta infección tiene especial interés durante el embarazo, pues se asocia al desarrollo de malformaciones. En este caso tiene especial interés la determinación de la IgM específica, que puede tardar 1 mes en aparecer , por lo que hay que repetir entonces la prueba 3 semanas después.

Equivalencia entre las diferentes formas de medir los anticuerpos antirrubeóla

INMUNOFLUORESCENCIA	ELISA	SIGNIFICADO
1/8	4-9 U	NEGATIVO
1/16	10-25 U	INMUNIDAD BAJA
1/32	26-42 U	CIERTA PROTECCIÓN
1/64	50-200 U	INFECC.RELATIV. RECIENTE
1/ 1024	433-570 U	INFECC. RECIENTE

En general, títulos iguales o superiores a 1/64 indican buena protección.

Tarea No. 1

Las sustancias organicas son:

son sustancias químicas que contienen carbono, formando enlaces covalentes carbono-carbono y/o carbono-hidrógeno. En muchos casos contienen oxígeno, y también nitrógeno, azufre, fósforo, boro, halógenos y otros elementos. Estos compuestos se denominan Moléculas orgánicas. No son moléculas orgánicas los compuestos que contienen carburos, los carbonatos y los óxidos de carbono.
Las moléculas orgánicas pueden ser de dos tipos:
Moléculas orgánicas naturales: Son las sintetizadas por los seres vivos, y se llaman biomoléculas, las cuales son estudiadas por la bioquímica.
Moléculas orgánicas artificiales: Son sustancias que no existen en la naturaleza y han sido fabricadas por el hombre como los plásticos.
La línea que divide las moléculas orgánicas de las inorgánicas ha originado polémicas e históricamente ha sido arbitraria, pero generalmente, los compuestos orgánicos tienen carbono con enlaces de hidrógeno, y los compuestos inorgánicos, no. Así el ácido carbónico es inorgánico, mientras que el ácido fórmico, el primer ácido graso, es orgánico. El anhídrido carbónico y el monóxido de carbono, son compuestos inorgánicos. Por lo tanto, todas las moléculas orgánicas contienen carbono, pero no todas las moléculas que contienen carbono, son moléculas orgánicas.

EJEMPLOS:

Carbohidratos.
Lípidos.
Aminoácidos.
Proteínas.
Nucleotidos.
Acidos nucleicos.

Las moleculas inorganicas:

la moléculas inorgánicas son aquellas que no tiene carbono por ejemplo la sal común de mesa,cuya fórmula es NaCl (Cloruro de Sodio).
ejemplos:
EL AGUA

definicion
es la molecula inorganica mas abundante tanto en la naturaleza como en la materia viva.

la molecula de agua
consta de dos atomos de hidrogeno unidos a un atomo de oxigeno mediante enlaces covalentes polares lo que determinaque la molecula sea un dipolo cuyo angulo de enlaces es de 104.5 grado, esto favorece a la solvatiacion ionica.

Camara de Neubawer

Recuento de eritrocitos: ejemplo

Observe que en la grilla de la cámara de Neubauer las áreas de recuento de eritrocitos y linfocitos son diferentes. Los glóbulos rojos se cuentan en las áreas coloreadas de rojo, mientras que los glóbulos blancos se cuentan en las áreas coloreadas de azul. Ten en cuenta que la grilla central tiene 25 cuadrados de 1mm x 1mm de área y 0.10 mm de profundidad. El factor de dilución es por tanto de 1:200. Convierte el número de glóbulos rojos contados en 5 cuadrados a nº glóbulos rojos/µl. (1 µl (microlitro) = 1 mm3 ) Como se hace?

La imagen de abajo simula el campo que esta viendo al microscopio con un objetivo de 45x. Solo es visible el centro de la grilla. Intenta verificar esto al ir moviendo el campo de derecha-izquierda y de arriba-abajo, como si de una pletina de microscopio se tratase. Cuenta los glóbulos rojos en los cinco cuadrados mencionados anteriormente y determina el recuento de eritrocitos como se ha descrito anteriormente.. Muy importante: Cuando un eritrocito se sitúa en mitad de las líneas superior y/o de la izquierda, entonces es contabilizado. Pero no se contabiliza cuando se sitúa en mitad de las líneas inferior y/o de la derecha..

El rango normal de recuento de glóbulos rojos es el siguiente: Mujeres: 3.9-5.6 millones/µl Hombres: 4.5-6.5 millones/µl Determine el recuento del sujeto cuya muestra aparece en la imagen. Cual es la solución?

Técnicas de estudio de líneas celulares TÉCNICAS DE CONTAJE CELULAR Una suspensión celular se caracteriza por presentar un número de partículas microscópicas dispersas en un fluido. Habitualmente será necesario determinar tanto la densidad de las células en la suspensión como el porcentaje de éstas que son viables. Para determinar la densidad de las células se emplean diferentes técnicas, desde la relativamente simple cámara de contaje celular de la que existen numerosas variantes, entre ellas la que empleamos (cámara de Neubauer), hasta equipos automáticos de contaje celular como el "Cell Coulter" de la empresa Beckman-Coulter. El principio del contador celular se basa en la medida de los cambios en la resistencia eléctrica que se producen cuando una partícula no conductora en suspensión en un electrolito atraviesa un pequeño orificio. Como se puede ver en el esquema, una pequeña abertura entre los electrodos es la zona sensible a través de la que pasan las partículas que se encuentran en suspensión. Cuando una partícula atraviesa el orificio desplaza su propio volumen de electrolito. El volumen desplazado es medido como un pulso de voltaje. La altura de cada pulso es proporcional al volumen de la partícula. controlando la cantidad de la suspensión que circula a través del orificio es posible contar y medir el tamaño de las partículas. Es posible contar y medir varios miles de partículas por segundo, independientemente de su forma, color y densidad. En la unidad de Citometría de flujo y Microscopia Confocal de los Servicios Científico-Técnicos de la Universidad de Barcelona se dispone de contadores celulares. Sin embargo, es posible determinar la densidad celular empleando métodos más sencillos. Nos basta con una cámara de contaje celular, por ej. la cámara de Neubauer, y un microscopio. Una cámara de contaje celular es un dispositivo en el que se coloca una muestra de la suspensión a medir. El dispositivo presenta unas señales que determinan un volumen conocido (x microlitros). Al contar bajo el microscopio el número de partículas presentes en ese volumen se puede determinar la densidad de partículas en la suspensión de origen. La cámara de Neubauer es una cámara de contaje adaptada al microscopio de campo claro o al de contraste de fases. Se trata de un portaobjetos con una depresión en el centro, en el fondo de la cual se ha marcado con la ayuda de un diamante una cuadrícula como la que se ve en la imagen. Es un cuadrado de 3 x 3 mm, con una separación entre dos lineas consecutivas de 0.25 mm. Así pues el área sombreada y marcada L corresponde a 1 milimetro cuadrado. La depresión central del cubreobjetos está hundida 0.1 mm respecto a la superficie, de forma que cuando se cubre con un cubreobjetos éste dista de la superficie marcada 0.1 milímetro, y el volumen comprendido entre la superficie L y el cubreobjetos es de 0.1 milímetro cúbico, es decir 0.1 microlitro. Si contamos las cuatro áreas sombreada (L) observando un total de x células entre las cuatro áreas, la concentración en la suspensión celular será : concentración en la suspensión (células / mL) = 10000 (x/4) En la imagen puedes observar el aspecto de una de las regiones marcadas como L y que en el microscopio se ven como una cuadrícula de 16 pequeños cuadrados de 0.25 milímetros de lado. Esta imagen ha sido tomada empleando un microscopio invertido de contraste de fases. Existen numerosos modelos de cámaras de contaje celular adaptadas a su uso en microscopía. En la imagen puedes observar una cámara de Neubauer doble, como las que usas en el laboratorio de prácticas. Para determinar la viabilidad celular se emplean diferentes métodos. El más común es el de tinción con azul tripán. El azul tripán es un coloide que se introduce en el interior de las células que presentan roturas en la membrana. Así pues las células que aparecen en la imagen, claramente de color azul, son consideradas no viables. Asimilar células blancas, por exclusión, a células viables es un error pues por este método se sobrevalora la viabilidad de las células en la suspensión, determinando como inviables sólo aquellas con la membrana rota. Existen otros métodos de determinación de la viabilidad celular como el más preciso de la tinción con ioduro de propidio En la red dispones de descripciones detalladas sobre como utilizar un hemocitómetro, como la propuesta por P.J. Hansen, o la detallada descripción que aporta Beckton-Dickinson, y los problemas de cálculo de parámetros celulares que plantea empleando datos obtenidos a partir de un hemocitómetro, y otros protocolos para el contaje de células (en protocol-online) - arriba -

se aseptiza el dedo con alcohol y luego se seca al aire o con algodón. Se coge entre el pulgar y el índice y se hace una punción rápida y penetrante a través de la piel de la punta del dedo con una lanceta estéril.
2. Se deshecha la primera gota de sangre y se aspira la siguiente con la pipeta de dilución perfectamente limpia y seca hasta la señal 1 o 0.5 (también puede utilizarse la pipeta de hemoglobina, de 20 microlitros). Hay que evitar la entrada de burbujas de aire, pudiendo ayudarnos de un papel de filtro para conseguir el enrasado.
3. A continuación se toma con la pipeta líquido de Hayem, isotónico con la sangre, hasta la señal 1; así, la sangre queda diluida al 1/10, si tomamos sangre hasta la señal 1, o al 1/20 si tomamos hasta 0.5. Esto es así porque el volumen de la bola de la pipeta es 100 veces superior al del capilar de la misma. (Si hemos utilizado la pipeta de hemoglobina podemos diluir su contenido en 2 o 4 ml de líquido de Hayem para obtener diluciones 1/100 o 1/200).
4. Tomamos la pipeta (o el tubo de ensayo) entre los dedos índice y pulgar y agitamos. A través de la goma de conexión con la pipeta, soplamos para despreciar las primeras gotas por corresponder al líquido que estaba en el capilar.
5. Se adapta un cubreobjetos sobre una cámara cuentaglóbulos limpia y seca y se coloca una gota en uno de los lados del cubre; esta gota penetra por capilaridad y rellena el retículo de la misma.
6. Una vez preparada la cámara se coloca sobre la platina del microscopio dejándose unos minutos en reposo para que sedimenten los glóbulos. Disponemos el condensador bajo y luz débil; enfocamos primero con el objetivo débil seco y luego se cambia al fuerte seco para proceder al recuento, que se lleva a cabo en los cuadrados pequeños del retículo marcado en color rojo. Finalizado el recuento se procede a la limpieza de la pipeta con acético 1:3, agua destilada y alcohol-éter sucesivamente.
7.El volumen de sangre en el cual se han contado las células resulta de multiplicar la profundidad de la cámara por el factor de dilución, la superficie de los cuadrados y el número de cuadrados contados. Con cámara de NEUBAUER: Superficie de 1 cuadrado grande (1/20 mm de lado): Volumen de un cuadrado grande (1/10 mm de profundidad): Si contamos "a" glóbulos rojos en "n" cuadrados pequeños, el número de glóbulos por cuadrado será a/n. Si en un volumen 1/4000 mm3 hay a/n glóbulos rojos, en 1 mm3 habrá X. Luego: siendo X el número de glóbulos rojos existentes por cada mm3 de sangre diluida. Si la sangre se diluyó a 1/100 o 1/200, habrá que multiplicar el valor X por 100 o 200 respectivamente, con lo cual obtendremos un nuevo valor, Y, que representa el número de glóbulos rojos existentes por cada mm3 de sangre (sin diluir).

Se utilizan para calcular, mediante el uso del microscopio, el número de partículas (leucocitos, hematíes, bacterias...) por unidad de voluimen de un líquido.

La cámara está constituida por una placa base de vidrio especial pareciso a un porta, su parte central se encuentra separada de los extremos por unas ranuras. en ella se encuentran las cuadrículas de recuento.

La fórmula de contaje es: partículas/mm3= partículas contadas.

Clases de cámaras:

- Neubauer improved: Es el más utilizado (9 cuadros grandes, cada 1 de 1 mm2.)

- Neubauer: La diferencia es el cuadro grande central.

- Thoma: Se utiliza solo para el recuento de eritrocitos.

- Fuchs-Rosenthal: Se utiliza habitualmente para recuento de células en líquidos orgánicos (LCR, Líquido sinovial...)